ORDINARE
DEL DNA
Priorità
bassa
Ordinare
del DNA coinvolge un processo che avete imparato più
presto,
quello è la catena Recation o PCR della polimerasi.
Lo
scopo di ordinare è determinare l'ordine dei
nucleotidi di un
gene. Questo ordine è il tasto alla comprensione
del genome umano. Frederick Sanger in primo luogo
è stato accreditato con l'invenzione
di DNA che ordina le tecniche in serie.
Il
metodo del Sanger ha coinvolto copiare i fili del
DNA che
mostrerebbero alla posizione dei nucleotidi nei fili
comunque l'uso
delle macchine dei raggi X. Questa tecnica è
molto lenta e noiosa, solitamente prendendo a molti
anni alla sequenza soltanto alcune milione lettere
in una serie di DNA
che contengono spesso le centinaia di milioni o persino
dei miliardi
di lettere. Le tecniche moderne usano le modifiche
fluorescenti anziché i raggi
X. Ciò ha ridotto significativamente il tempo
richiesto per elaborare
una data serie di DNA
In
1991, funzionare con il laureate Hamilton Smith, il
progetto di
ricerca genomic del Venter (TIGR) Nobel ha creato
nuovo ' shotgunning
coniato processo ordinante GRASSETTO.' dorato &
Lemonick (2000) descriva ' shotgunning ':
"
usando un miscelatore ordinario della cucina, frantumerebbero
il DNA
dell'organismo in milioni di piccoli frammenti, farli
funzionare tramite i continuatori (che possono indicare
500 lettere alla volta), quindi per riunirle nei genomes
completi usando un software ad alta velocità
del romanzo e del calcolatore scritto dal whiz interno
Granger Sutton del calcolatore "
Questo
nuovo metodo segue non soltanto le macchine automatizzate
veloci eccellenti, ma anche il processo fluorescente
di rilevazione e la procedura di copiatura del DNA
di PCR. Questo metodo è molto veloce ed esatto
confrontato alle più vecchie tecniche.
Come
Ordinare Del DNA È fatto
Ordinare
del DNA è una tecnica nucleotide-ordinante
complessa
compreso tre punti identificabili:
·
di reazione a catena della polimerasi del
·
(PCR) che ordina elettroforesi del gel del
· di reazione & elaborazione elettronica
in serie
I
cromosomi, che variano nel formato da 50 milione -
250 milione basi devono in primo luogo essere rotti
nelle parti molto più corte (punto di PCR)
Ogni
parte corta è usata come mascherina per generare
un insieme dei frammenti che differiscono da di lunghezza
da a vicenda da una singola base che sarà indentified
ad un punto successivo (preparazione della mascherina
ed ordinare i punti in serie di reazione
I
frammenti in un insieme sono separati tramite l'elettroforesi
del
gel (punto di separazione).
Le nuove tinture fluorescenti permettono la separazione
di tutti e
quattro i frammenti in un singolo vicolo sul gel.
L'immagine
ha riprodotto con permesso da http://allserv.rug.ac.be/~avierstr/principles/seq.html
La
base finale all'estremità di ogni frammento
è identificata
(base-chiamando punto). Questo processo ricrea la
sequenza originale di come, st, Cs e Gs per
ogni parte corta generata al primo punto
I
limiti correnti di elettroforesi sono circa 500 -
700 basi ordinate
per colto. I continuatori automatizzati analizzano
gli elettroferogrammi
risultanti e l'uscita è un cromatogramma di
quattro-colore che mostra
i picchi che rappresentano ciascuna delle 4 basi del
DNA.
I frammenti fluorescently identificati che migrano
attraverso il gel,
sono passati attraverso un fascio laser alla parte
inferiore del gel. Il laser esce la molecola fluorescente,
che spedisce la luce di un
colore distinto. Che la luce è raccolta e messa
a fuoco dagli obiettivi in uno
spettrografo. Sulla base della lunghezza d'onda, lo
spettrografo separa la luce
attraverso una macchina fotografica del CCD (dispositivo
coppia
carica). Ogni base ha relativo proprio colore, in
modo da il continuatore può
rilevare l'ordine delle basi nel gene ordinato.
L'immagine
ha riprodotto con permesso dahttp://allserv.rug.ac.be/~avierstr/principles/seq.html
Dopo
che le basi " siano lette, " i calcolatori
sono utilizzati per
montare le sequenze corte (nei blocchi di circa 500
basi ciascuno,
chiamati la lunghezza colta) nelle stirate continue
lunghe che sono
analizzate per gli errori, le regioni di gene-codificazione
ed altre
caratteristiche.
