DNACSequentiell
ORDNEN
Hintergrund
Das
DNASEQUENTIELL ordnen bezieht einen Prozeß,
den Sie früh erlernt
haben, das ist die Polymerasekette Recation oder PCR
mit ein.
Der
Zweck des Sequentiell ordnens ist, die Ordnung der
Nukleotide
eines Gens festzustellen. Diese Ordnung ist die Taste
zum Verständnis des menschlichen Genoms. Frederick
Sanger wurde zuerst mit der Erfindung von DNA Techniken
sequentiell ordnend beglaubigt.
Annäherung
Sangers bezog mit ein, DNA-Fasern zu kopieren, die
dem
Standort der Nukleotide in den Fasern zwar den Gebrauch
der
Röntgenstrahlmaschinen zeigen würden. Diese
Technik ist sehr langsam und langwierig und normalerweise
nimmt
vielen Jahren zur Reihenfolge nur einige Million Briefe
in einer
Zeichenkette von DNA, die häufig Hunderte Millionen
oder sogar
Milliarden Zeichen enthalten. Moderne Techniken gebrauchen
Leuchtstoffmarken anstelle von den
Röntgenstrahlen. Dieses verringerte erheblich
die Zeit, die angefordert wurde, um eine
gegebene Reihe von DNA zu verarbeiten
1991
erstellte das Arbeiten mit Nobellaureate Hamilton
Smith, Venters
genomic Forschungsprojekt (TIGR) ein fettes neues
sequentiell
ordnendes Prozeß geprägtes ' Shotgunning.'
golden u. Lemonick (2000) beschreiben Sie ' shotgunning
':
"
mit einer gewöhnlichen Küchemischmaschine,
würden sie DNA des
Organismus in Millionen der kleinen Fragmente, sie
durch die
Anreihungen (die laufen zu lassen 500 Briefe hintereinander
lesen
können), dann sie, in volle Genome mit einer
Hochgeschwindigkeitscomputer- und Romansoftware neu
zusammenzustellen
zerbrechen, die durch internes Computerwhiz Granger
Sutton geschrieben
wurde "
Diese
neue Methode verwendet nicht nur schnelle automatisierte
Supermaschinen, aber auch den Leuchtstoffabfragungsprozeß
und die
kopierenprozedur DER PCR-DNA. Diese Methode ist sehr
schnell und verglichen mit älteren Techniken
genaues.
Wie
Das DNASequentiell ordnen Erfolgt Ist
Das
DNASEQUENTIELL ordnen ist eine komplizierte Nukleotid-sequentiell
ordnende Technik einschließlich drei identifizierbarer
Jobsteps:
·
der ·polymerase-Kettenreaktion (PCR), das
Reaktions·-Gelelektrophorese u. die Computerverarbeitung
sequentiell
ordnet
Chromosomen,
die in der Größe von 50 Million bis 250
Million
Unterseiten sich erstrecken, müssen in viel kürzere
Stücke
(PCR-Jobstep) zuerst gebrochen werden
Jedes
kurze Stück wird als Schablone benutzt, um ein
Set Fragmente
festzulegen, die in der Länge von einander durch
eine einzelne
Unterseite sich unterscheiden, die indentified in
einem neueren
Jobstep ist (Schablonenvorbereitung und Sequentiell
ordnen von
Reaktionsjobsteps)
Die
Fragmente in einem Set werden durch Gelelektrophorese
getrennt
(Trennungjobstep).
Neue
Leuchtstofffärbungen erlauben aller Trennung,
das vier Fragmente
im einem aufdemgel Weg einzelnen.
Die
abschließende Unterseite am Ende jedes Fragments
wird
gekennzeichnet (Jobstep Unterseite-benennend). Dieser
Prozeß erstellt die ursprüngliche Reihenfolge
von wie, Ts, Cs
und Gs für jedes kurze Stück neu, das im
ersten Jobstep festgelegt
wird
Aktuelle
Elektrophoresebegrenzungen sind ungefähr 500
bis 700
Unterseiten, die pro gelesen sequentiell geordnet
werden. Automatisierte Anreihungen analysieren die
resultierend
Elektropherogramme und die Ausgabe ist ein Vierfarbenchromatogramm,
das Spitzen zeigt, die jede der 4 DNA-Unterseiten
darstellen.
Die
fluorescently beschrifteten Fragmente, die durch das
Gel
fortziehen, werden durch einen Laserstrahl an der
Unterseite des Gels
geführt. Der Laser beendet das Leuchtstoffmolekül,
das Licht einer eindeutigen
Farbe aussendet. Daß Licht durch Objektive in
einen Spektrograph gesammelt und
fokussiert wird. Gegründet auf der Wellenlänge,
trennt der Spektrograph das Licht
über einer CCD-Kamera (Ladung verbundene Einheit).
Jede Unterseite hat seine eigene Farbe, also kann
die Anreihung die
Ordnung der Unterseiten im sequentiell geordneten
Gen ermitteln.
