Jeudi 02 mars 2006
Nous avons changé l'environnement de la culture des cellules deux fois. La première fois 5 jours après le début de la culture et la deuxième fois 8 jours après sa création. Le premier passage a eu lieu 10 jours après c'est-à-dire aujourd'hui.
Composition du milieu de culture DMEM – FBS fétus de bovin
Les cellules on été l'objet d'un passage aujourd'hui. Le passage est fait dans l'objectif d'une purification supplémentaire et consiste à faire passer les cellules d'un milieu plus petit vers un milieu plus grand. Si le milieu de culture est petit, les cellules rentrent dans une phase de vieillissement. Si les cellules ne sont pas collées, le milieu ainsi que les cellules sont transférées via le tube Falcon 15 vers la centrifuge. Ensuite le liquide superficiel est jeté tandis que les cellules déposées au fond sont gardées. Ces cellules déposées sont dissous dans le nouveau milieu et sont transférés vers le nouveau milieu. Dans le cas des cellules fondamentales mésenchymes qui ont une forme conique et sont collées au fond de la centrifugeuse, on utilise la trypsine à 25 %. On extrait le liquide qui couvre les cellules dans des conditions de stérile en lui ajoutant 2 ml de FBS. On enlève par la suite le FBS et on ajoute 0,5 à 1 ml de trypsine et on visualise constamment sous le microscope. Afin de neutraliser la trypsine on utilise un milieu de culture qui contient du sérum en ajoutant jusqu'à 4 ml. Enfin, à l'aide d'une pipette on transfert délicatement le liquide contenant les cellules vers un milieu plus grand et on lui ajoute le milieu de culture.
Les cellules de la moelle du rat après l'opération de passage |
